Конструирование и характеристика аттенуированных рекомбинантных штаммов вируса гриппа, экспрессирующих интерлейкин-1β человека
Abstract
Применение живых аттенуированных гриппозных векторов требует баланса между снижением вирулентности и сохранением иммуногенности. Один из возможных подходов для усиления иммуногенности и защитной эффективности таких аттенуированных штаммов — встраивание в геном вируса трансгенов, способных активировать врожденный и адаптивный иммунитет. Цель экспериментального исследования — сконструировать рекомбинантные аттенуированные вирусы гриппа, способные экспрессировать IL1β человека, и провести сравнительный анализ их репликативных свойств, иммуностимулирующей активности и профиля безопасности in vivo. Рекомбинантные штаммы с различным положением трансгена получили методом обратной генетики, провели оценку их ростовых характеристик и уровня экспрессии трансгена. Активацию генов врожденного иммунитета изучали в культуре клеток А549 в ответ на заражение рекомбинантными штаммами. Аттенуированный фенотип подтверждали в модели мышей. В представленном исследовании были сконструированы и получены рекомбинантные аттенуированные вирусы гриппа, имеющие укороченный до 124 аминокислот белок NS1 и экспрессирующие IL1β человека. Подтверждена способность рекомбинантных штаммов экспрессировать функционально активный IL1β, показано усиление относительной экспрессии генов врожденного иммунитета (RIG-I, MDA5, OAS1), а также провоспалительных цитокинов (IL6 и TNFα) в ответ на инфицирование клеток рекомбинантными штаммами по сравнению с пустым вектором NS124. Так, экспрессия гена IL6 увеличивалась более чем в 10 раз (p < 0,0001), а гена TNFα — в 3–4 раза (p < 0,0001). В экспериментах in vivo был подтвержден аттенуированный фенотип полученных рекомбинантных штаммов, что свидетельствует о сохранении профиля безопасности наряду с усиленной иммуностимулирующей активностью.